Southernblot

Tehnica de detectare si izolare a unor sec­vente specifice de ADN la nivelul unui te­sut/cultura de celule etc.

Metoda consta in:

• liza celulelor si extragerea ADN celular;
• fragmentarea moleculelor de ADN prin actiunea endonucleazelor de restrictie;
• separarea fragmentelor de ADN, in func­tie de marime, prin electroforeza in gel de agar si denaturarea lor in mediu alcalin, in fragmente ADN monocatenare;
• transferul fragmentelor monocatenare de ADN pe o membrana de nitroceluloza sau nylon, prin gradient de presiune osmotica sau sub vid;
• identificarea fragmentelor specifice de ADN prin hibridare cu probe de ADN mo­nocatenar cu secventa cunoscuta, com­plementara celei cautate, marcate radio­activ sau enzimatic.

Sensibilitatea tehnicii poate fi mult ameliorata prin executarea, inainte de transferul frag­mentelor ADN pe membrana nitrocelulozica, a unei proceduri de amplificare genica (PCR). Costisitoare, tehnica este folosita in derma­tologie in scop de cercetare, sau in unele centre, ca metoda de diagnostic (de exem­plu identificarea prezentei intr-un tesut a fragmentelor genomice microbiene sau tu-morale, demonstrarea caracterului mono­clonal al proliferarii limfocitare in diagnosti­cul limfoamelor T (studiul rearanjarii geni­ce) sau de detectare prenatala a unor geno­dermatoze).

← Boala Kwashiorkor Sindromul Tricorinofalangian →

Despre: sec­vente specifice ADN, southernblot